一、什么叫重组质粒和导入原质粒?
有目的基因,有质粒,然后用酶使两者相接就是重组质粒,重组质粒是一个种动作,方法,也是一个名词。基本信息 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。
原核生物一般都有质粒,可以把真生物的基因连接在质粒上再导入原核细胞即可。
所需要的酶是:切割质粒的限制性内切酶、将二者连接完整的连接酶。
提取原核细胞的质粒、用同一种限制酶切割提取目的基因 → 用限制酶切割质粒 → 用连接酶连接完整 → 导入原核细胞
二、重组质粒的必需结构?
重组质粒的组成要含有目的基因,标记基因,启动子,终止子,复制原点。
质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。
三、重组质粒的形成条件?
只要目的基因和质粒,用同种限制酶切割,有相同的黏性末端,就可形成重组质粒。
四、重组质粒如何表达蛋白?
质粒存在细菌和真菌里,当提到取质粒基因用DNA剪切酶作用后得到的DNA序列段再与目的基因与DNA黏合酶作用下得到目的质粒基因,培养后植入发酵菌细胞中。发酵后就可以提取产物。
质粒上原有的基因也会表达,重组后的基因也会表达,目的蛋白和原有质粒基因蛋白、目的基因质粒基因蛋白。三者混合在一起,要进行筛选(筛选方法自然很多)得到目的蛋白质。
五、构建重组质粒的目的?
利于目的基因进入受体细胞,利于目的基因在受体细胞内稳定存在和表达。
六、质粒的同源重组是什么原理?
那就要看是什么菌种的,有些菌种是重组酶缺陷的,比如TOP10、stbl3等等,有些菌种表达重组酶,只要有同源序列,就容易发生重组。你要好好看看菌种的说明书,看看是不是重组缺陷的。
七、质粒与目的基因重组的原理?
质粒是必须进入受体细胞的,它不仅是目的基因的载体,也是目的基因能够在受体细胞中稳定遗传的工具。把目的基因重组到质粒上主要也是为了能够让其在受体细胞中稳定遗传,因为单独的目的基因无法再受体细胞中稳定遗传到子代中去,而质粒可以很好地起到一个随核基因一块复制和分配到各代子细胞中去的作用。
八、重组DNA分子和重组质粒有什么区别吗?
重组DNA分子范围更广些。
重组质粒是一种重组DNA。重组DNA分子可以有多种形式,运用不同的载体。质粒就是一种载体。其他的还可以有别的载体。重组质粒是重组DNA分子的一种。
DNA分子是链状,而重组质粒是小型环状DNA。
DNA重组:DNA分子内或分子间发生的遗传信息的重新共价组合过程。包括同源重组、特异位点重组和转座重组等类型,广泛存在于各类生物。体外通过人工DNA重组可获得重组体DNA,是基因工程中的关键步骤。
九、同源重组构建质粒原理及方法?
原理依赖于限制性核酸内切酶,DNA 连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体 DNA 进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。
传统的构建重组质粒的方法为TA克隆。该方法需要将构建进载体的片段通过PCR技术引入合适的酶切位点扩增出来,随后与T载体进行连接。将连接好的质粒转化大肠杆菌进行扩增,随后对扩增好的质粒进行酶切,得到含有粘性末端的片段。将该片段与同样经过双酶切的载体进行连接,转化大肠杆菌后即可得到重组质粒。
十、质粒和重组质粒中标记基因的作用分别是什么?
1、质粒中标记基因的作用是有利于对目的基因是否导入进行检测。
2、重组质粒上的标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
质粒和重组质粒中的标记基因主要是用于筛选,一般选择抗性基因来作为标记基因,这样就可以在相应的抗性培养基中生长,达到筛选目的
扩展资料:
那怎么鉴定和选择重组基因?
标记基因一般是是青霉素等抗病基因,然后可以让细胞在培养皿中被细菌感染,有标记基因的就能抵抗细菌,而不死,从而将含有目的基因(即含有标记基因)的细胞筛选出来。
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